不論你是剛?cè)雽嶒炇茵B(yǎng)細胞的萌新,還是有著數(shù)十年細胞培養(yǎng)經(jīng)驗的大牛,都會碰到細胞生長速度緩慢、形態(tài)變差、細胞脫壁、邊緣萎-縮等許多問題,明明已經(jīng)為細胞“鞍前馬后”、關(guān)懷備至,但各種意外還是頻頻發(fā)生。出現(xiàn)以上狀況,你的細胞很可能是營養(yǎng)不良了。
細胞在體內(nèi)依附于機體生長,由血液循環(huán)提供能量和物質(zhì),在體外培養(yǎng)細胞則需要基礎(chǔ)培養(yǎng)基營造生長環(huán)境,并由血清提供細胞生長所需的營養(yǎng)物質(zhì),因此血清的質(zhì)量好壞直接影響細胞生長狀態(tài)。所謂“一招不慎,滿盤皆輸”,今天小編就跟大家聊聊在細胞培養(yǎng)中如何選擇優(yōu)-質(zhì)的血清?
要想挑選合適的血清,首先我們需要了解血清,血清是什么?血清是指血液凝固后,去除血漿中纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色澄清液體。血清是細胞培養(yǎng)中用量蕞大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成分,發(fā)揮著極為重要的功能。血清含有各種氨基酸、維生素、無機物、脂類物質(zhì)等維持細胞生長必須的營養(yǎng)物質(zhì),也含有胰島素、氫-化可的松、地塞-米松、bFGF、EGF、PDGF、轉(zhuǎn)鐵蛋白等可促進細胞生長的激素、生長因子及結(jié)合蛋白。此外,血清還有解毒、緩沖、抑制蛋白酶活性等作用保護細胞不受傷害。
接下來小編就從血清的分類、血清的來源和制作工藝、血清的檢測標(biāo)準(zhǔn)三個環(huán)節(jié)給大家講一講如何挑選血清。
一、 胎牛or新生牛or小牛血清?傻傻分不清
血清的不同成分及其含量會因供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件的不同而有所差異。按照牛是否出生及出生時間的長短,可將牛血清分為胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、成牛血清和供體牛血清。國內(nèi)外對不同等級牛血清的定義有所區(qū)別,上主要參考歐洲藥典和美國藥典頒布的指南,國內(nèi)則以2015版《中華人民共和國藥典》(以下簡稱中國藥典)為標(biāo)準(zhǔn)。中國藥典僅對新生牛血清做出了規(guī)定(表1 國內(nèi)外對不同等級牛血清的定義)。
表1,國內(nèi)外對不同等級牛血清的定義
· 胎牛血清:胎牛在母體內(nèi)與外界隔絕,通過心臟穿刺采血,血清中營養(yǎng)成分和細胞因子含量高、異源物質(zhì)少,品質(zhì)蕞佳,是科學(xué)研究中蕞常使用的血清,適用于絕大多數(shù)原代細胞和細胞系;
· 新生牛血清:新生牛出生后控制在一定的時間內(nèi)采血,成分上比較接近胎牛血清,且來源相較于胎牛血清更加充足,性價比更高,適合培養(yǎng)比較容易生長的腫瘤細胞系,可以滿足有大規(guī)模生產(chǎn)血清需求的企業(yè)。中國藥典和歐美藥典對于新生牛出生時間的定義存在一定差異;
· 小牛血清、成牛血清:隨著小牛的生長發(fā)育,血清成分會發(fā)生變化,如免疫球蛋白含量增加,血清所含的促細胞生長因子、激素及其他活性物質(zhì)的組份與比例也不同。該類血清異源物質(zhì)增多,成分也比較復(fù)雜,所以對細胞培養(yǎng)的干擾因素比較多,因此小牛血清和成牛血清一般不用于細胞培養(yǎng),更多用作封閉液、稀釋液等;
· 供體牛血清:是通過對牛群來源管控、物?隔離和檢驗檢疫,減少外源因子的污染,且利用活體反復(fù)采血的方法來生產(chǎn)牛血清,主要作為醫(yī)藥生產(chǎn)用血清。
選擇合適的血清,既要考慮到細胞需求,也要考慮性價比?,F(xiàn)如今,上對不同等級血清的劃分標(biāo)準(zhǔn)和管控要求越發(fā)嚴格,分級使用血清已逐漸為各行各業(yè)所認可。
二、源頭放心+工藝安心=品質(zhì)稱心
牛血清是一種*產(chǎn)物,因此牛源健康狀況和生長環(huán)境就尤為重要。世界動物衛(wèi)生組織(OIE)對一個國家或地區(qū)動物感染疾病(如瘋牛?。┑目赡苄杂幸粋€評價指標(biāo),稱為地域性瘋牛病風(fēng)險評估(GBR),它將每個國家或地區(qū)的瘋牛病風(fēng)險進行分類和監(jiān)控,以避免瘋牛病的傳播。從*數(shù)據(jù)來看,澳洲、部分南美洲和北美洲國家沒有瘋牛病(BSE)和口蹄疫(FMD)疫情,目前中華人民共和國海關(guān)總署允許進口的牛血清產(chǎn)地只有澳大利亞、新西蘭和烏拉圭,市面上其他血源地的牛血清都是非法走-私血清。
走-私血清“魚目混珠”,缺乏檢驗檢疫監(jiān)管,生產(chǎn)、冷鏈運輸無法保障,批內(nèi)和批間穩(wěn)定性無法控制,導(dǎo)致細胞培養(yǎng)過程狀況頻發(fā),甚至損失珍貴的細胞;其次,很多走-私的牛血清來自發(fā)生過瘋牛病疫情的國家,未經(jīng)檢疫的血清中可能攜帶傳染病毒,對研究和生產(chǎn)人員的生命健康以及下游產(chǎn)品帶來重大威脅。